АНАЛИЗ ИЗМЕНЕНИЯ АКТИВНОСТИ МИТОХОНДРИЙ В ООЦИТАХ КОРОВ В ПРОЦЕССЕ ИХ СТАРЕНИЯ IN VITRO

А. В. ЛОПУХОВ¹, Е. Н. ШЕДОВА¹, Е. В. ЦЫНДРИНА¹, Г. Н. СИНГИНА¹

Аннотация. Cтарение созревших ооцитов млекопитающих in vitro влияет на их дальнейшее практическое и научное использование. Тем не менее, существует мало данных об изменениях в ооцитах, происходящих в процессе их старения. В представленной работе изучен характер изменения активности митохондрий в зрелых ооцитах коров в процессе их пролонгированного культивирования in vitro. С этой целью ооцит-кумулюсные комплексы (ОКК) культивировали в течение 20 ч. в среде ТСM-199, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, 10 мкг/мл фолликулостимулирующего (ФСГ) и 10 мкг/мл лютеинизирующего гормонов. После созревания ОКК и освобожденные от клеток кумулюса ооциты (ДО) переносили в аналогичную, но без гонадотропных гормонов среду и культивировали дополнительно в течение 12 часов. С целью оценки активности митохондрий ооциты, достигшие стадии метафазы II в конце созревания и пролонгированного культивирования окрашивали MitoTracker Orange. Наблюдался невысокий уровень активности митохондрий в ооцитах непосредственно после завершения ими созревания, в то время как к 12 ч. пролонгированного культивирования активность митохондрий возрастала (P<0,05). В тоже время обнаружено, что удаление клеток кумулюса влияет на активность митохондрий в сторону ее понижения (Р<0,05). Полученные результаты свидетельствуют о повышении уровня митохондриальной активности в процессе старения ооцитов in vitro. Также они показывают, что удаление клеток кумулюса способно нивелировать данные возрастные изменения.

EVALUATION OF MITOCHONDRIAL ACTIVITY IN MATURE BOVINE OOCYTES DURING THEIR AGING IN VITRO

A. V. LOPUKHOV, E. N. SHEDOVA, E. V. TSYNDRINA, G. N. SINGINA 

Abstract. Aging in in vitro-matured oocytes negatively affects its fitness. However, there are few data on aging-related changes in oocytes. In this research for was to determine the mitochondrial pattern of distribution of the matured bovine oocytes during their prolonged culture in vitro. Bovine cumulus-oocyte complexes (COCs) were cultured for 20 h in maturation medium (TCM 199 supplemented with 10% fetal calf serum (FCS), 10 μg/ml FSH, and 10 μg/ml LH). After IVM, COCs and oocytes denuded of their CCs (DO) were transferred to the aging medium consisting of TCM 199 supplemented with 10% fetal calf serum and prolonged cultured for 12 h. After maturation (20 h) or prolonged culture MII oocytes (12 h) were studied to determine mitochondrial activity using MitoTracker Orange fluorescence. For oocytes analyzed just after IVM mitochondrial activity was low, while after 12 h prolonged culture of mature bovine oocytes the activity increased (P<0,05). At the same time the removal of CCs before prolonged culture affected mitochondrial activity reducing (P<0,05). The result obtained point to increasing the level of mitochondrial activity during in vitro aging of bovine oocytes and to that the removal of CCs is able to decelerate these age-associated alterations.

¹ ФГБНУ «Федеральный научный центр животноводства — ВИЖ имени Л. К. Эрнста»; 142132, Московская обл., гор. окр. Подольск, пос. Дубровицы, д. 60.